781.裂(2/3)
和随后的肺内生长中都起着重要作用的观点。
最后，与实验结束时相比，在注射HLF稳定过表达的H1975细胞和下调H460细胞的小鼠肿瘤组织中，进一步证实了相应的高和低表达水平。
然后，采用体内左心室接种小鼠模型检测HLF对NSCLC远处转移能力的影响，将载体/NCIH1975、HLF过表达NCIH1975、载体/NCIH460和HLFsh#1/NCIH460细胞接种到小鼠左心室。
接种细胞6周后，收集小鼠的胫骨、脑、肝组织，并进行H&a;E染色处理。如图所示。图3FI和补充图4G，我们在与载体组相比，过HLF表达小鼠组中，包括骨、大脑和肝脏等远处器官检测到较少的转移性肿瘤，以及较长的累积存活期延长。
相比之下，沉默HLF可显著增强骨、脑和肝脏转移瘤的形成，并缩短生存期。
因此，这些结果表明，低表达HLF的NSCLC细胞具有更强的局部定植和生长能力，以及更强的远处转移能力。
我们利用CCK8、集落形成和An连接素凋亡进一步研究了HLF在NSCLC中的生物学功能，发现在正常培养条件下，HLF对NSCLC细胞的增殖和凋亡能力没有显著影响。
我们的结果显示，上调HLF会增加培养液的PH水平，而沉默HLF会降低培养基的pH水平，但正常情况下HLF并不影响NSCLC细胞的表型和数量。
低表达HLF可能通过营养代谢途径促进NSCLC细胞对低营养状态的适应，因为即使在正常的含氧条件下，癌细胞也更倾向于通过厌氧途径代谢。
然而，上调HLF抑制NSCLC的生长，而沉默HLF可促进NSCLC细胞的锚定和悬浮生长能力，表明沉默HLF增强了NSCLC细胞在悬浮条件下的生存能力，即anoikis耐药。这是各种癌症中与远处转移有关的转移性癌细胞的主要特征。
事实上，昼夜节律基因的失调导致了NSCLC的代谢失调，HLF广泛参与了多种物质代谢过程，包括脂质和氧化代谢。
在低血清和低葡萄糖培养液组成的低营养条件下，HLF过表达抑制了NSCLC细胞的增殖，但增加了凋亡潜能，反之亦然。
HLF参与了癌细胞生长培养基的营养代谢，这是HLF抑制NSCLC细胞生长的前提条件。
在低营养条件下观察NSCLC细胞HLF对葡萄糖、脂肪酸和蛋白质的影响。如补充图6A，HLF表达的改变并不影响总蛋白含量。然而，HLF的上调降低了葡萄糖、甘油三酯的消耗和乳酸的分泌，但增加了游离脂肪酸的水平。
矛盾的是，上调HLF增加了细胞内ATP的总产生和LDH的活性的活性，厌氧糖酵解限速酶，一些厌氧糖酵解和乳酸发酵相关基因，但增强了多个三羧酸循环相关基因。上诉结果表明，低表达HLF促进非小细胞肺癌细胞的厌氧代谢。
事实上，即使在氧含量正常的情况下，癌细胞也表现出葡萄糖代谢特征的改变，更倾向于无氧代谢，这一现象被称为“瓦伯格效应”。综上所述，我们的结果表明，低表达HLF可促进NSCLC细胞从三羧酸循环向厌氧代谢的首选代谢途径的转换，从而进一步促进细胞在低营养条件下的生长。
为了进一步确定低营养条件下HLF抑制NSCLC生长和转移的潜在机制，我们将多个信号通路的荧光素酶报告质粒转染到NSCLC细胞中。如图5A所示，上调HLF显著增强了NSCLC细胞PPAR信号活性，抑制了NFκB信号活性;相反，沉默HLF则产生相反的效果。
基于TCGA的NSCLC数据集中HLF的表达进行了基因集富集分析，结果显示HLF的表达水平与PPAR信号呈正相关，而与NFκB信号呈负相关。根据GSEA分析，HLF表达与脂质氧化和糖酵解显著相关。
重要的是，一些证据表明，HLF通过增加脂解诱导的游离脂肪酸积累，参与PPAR的易位和激活，通过破坏p65与靶DNA的结合，NFκB信号通路广泛参与了癌症的进展和转移。PPAR信号通路由PPARα、PPARβ/δ和PPARγ等几个家族成员组成。因此，确定参与HLF抑制NFκB信号通路以及NSCLC肿瘤发生和转移的特异性PPAR成员至关重要。
首先，检测10对NSCLC组织中PPARα、PPARβ/δ和PPARγ的表达水平。如补充图6G和H，PPARα在4/10对组织中表达显著下调，PPARγ在8/10对表达，而PPARβ/δ在8/10对组织中表达上调。已有广泛报道称PPARα和PPARγ在NSCLC中起肿瘤抑制信号的作用，而据报道PPARβ/δ对起致癌作用。
Westernblot分析一致显示，HLF的上调增加了PPARα和PPARγ的总表达和核易位，增加了IκBα的表达，但降低了磷酸化的NFκB和p65的总水平和核水平。相反，沉默HLF则发挥了相反的作用。因此，我们的研究结果表明，HLF在NSCLC中激活PPARα和PPARγ，抑制NFκB/p65信号通路。
我们使
最后，与实验结束时相比，在注射HLF稳定过表达的H1975细胞和下调H460细胞的小鼠肿瘤组织中，进一步证实了相应的高和低表达水平。
然后，采用体内左心室接种小鼠模型检测HLF对NSCLC远处转移能力的影响，将载体/NCIH1975、HLF过表达NCIH1975、载体/NCIH460和HLFsh#1/NCIH460细胞接种到小鼠左心室。
接种细胞6周后，收集小鼠的胫骨、脑、肝组织，并进行H&a;E染色处理。如图所示。图3FI和补充图4G，我们在与载体组相比，过HLF表达小鼠组中，包括骨、大脑和肝脏等远处器官检测到较少的转移性肿瘤，以及较长的累积存活期延长。
相比之下，沉默HLF可显著增强骨、脑和肝脏转移瘤的形成，并缩短生存期。
因此，这些结果表明，低表达HLF的NSCLC细胞具有更强的局部定植和生长能力，以及更强的远处转移能力。
我们利用CCK8、集落形成和An连接素凋亡进一步研究了HLF在NSCLC中的生物学功能，发现在正常培养条件下，HLF对NSCLC细胞的增殖和凋亡能力没有显著影响。
我们的结果显示，上调HLF会增加培养液的PH水平，而沉默HLF会降低培养基的pH水平，但正常情况下HLF并不影响NSCLC细胞的表型和数量。
低表达HLF可能通过营养代谢途径促进NSCLC细胞对低营养状态的适应，因为即使在正常的含氧条件下，癌细胞也更倾向于通过厌氧途径代谢。
然而，上调HLF抑制NSCLC的生长，而沉默HLF可促进NSCLC细胞的锚定和悬浮生长能力，表明沉默HLF增强了NSCLC细胞在悬浮条件下的生存能力，即anoikis耐药。这是各种癌症中与远处转移有关的转移性癌细胞的主要特征。
事实上，昼夜节律基因的失调导致了NSCLC的代谢失调，HLF广泛参与了多种物质代谢过程，包括脂质和氧化代谢。
在低血清和低葡萄糖培养液组成的低营养条件下，HLF过表达抑制了NSCLC细胞的增殖，但增加了凋亡潜能，反之亦然。
HLF参与了癌细胞生长培养基的营养代谢，这是HLF抑制NSCLC细胞生长的前提条件。
在低营养条件下观察NSCLC细胞HLF对葡萄糖、脂肪酸和蛋白质的影响。如补充图6A，HLF表达的改变并不影响总蛋白含量。然而，HLF的上调降低了葡萄糖、甘油三酯的消耗和乳酸的分泌，但增加了游离脂肪酸的水平。
矛盾的是，上调HLF增加了细胞内ATP的总产生和LDH的活性的活性，厌氧糖酵解限速酶，一些厌氧糖酵解和乳酸发酵相关基因，但增强了多个三羧酸循环相关基因。上诉结果表明，低表达HLF促进非小细胞肺癌细胞的厌氧代谢。
事实上，即使在氧含量正常的情况下，癌细胞也表现出葡萄糖代谢特征的改变，更倾向于无氧代谢，这一现象被称为“瓦伯格效应”。综上所述，我们的结果表明，低表达HLF可促进NSCLC细胞从三羧酸循环向厌氧代谢的首选代谢途径的转换，从而进一步促进细胞在低营养条件下的生长。
为了进一步确定低营养条件下HLF抑制NSCLC生长和转移的潜在机制，我们将多个信号通路的荧光素酶报告质粒转染到NSCLC细胞中。如图5A所示，上调HLF显著增强了NSCLC细胞PPAR信号活性，抑制了NFκB信号活性;相反，沉默HLF则产生相反的效果。
基于TCGA的NSCLC数据集中HLF的表达进行了基因集富集分析，结果显示HLF的表达水平与PPAR信号呈正相关，而与NFκB信号呈负相关。根据GSEA分析，HLF表达与脂质氧化和糖酵解显著相关。
重要的是，一些证据表明，HLF通过增加脂解诱导的游离脂肪酸积累，参与PPAR的易位和激活，通过破坏p65与靶DNA的结合，NFκB信号通路广泛参与了癌症的进展和转移。PPAR信号通路由PPARα、PPARβ/δ和PPARγ等几个家族成员组成。因此，确定参与HLF抑制NFκB信号通路以及NSCLC肿瘤发生和转移的特异性PPAR成员至关重要。
首先，检测10对NSCLC组织中PPARα、PPARβ/δ和PPARγ的表达水平。如补充图6G和H，PPARα在4/10对组织中表达显著下调，PPARγ在8/10对表达，而PPARβ/δ在8/10对组织中表达上调。已有广泛报道称PPARα和PPARγ在NSCLC中起肿瘤抑制信号的作用，而据报道PPARβ/δ对起致癌作用。
Westernblot分析一致显示，HLF的上调增加了PPARα和PPARγ的总表达和核易位，增加了IκBα的表达，但降低了磷酸化的NFκB和p65的总水平和核水平。相反，沉默HLF则发挥了相反的作用。因此，我们的研究结果表明，HLF在NSCLC中激活PPARα和PPARγ，抑制NFκB/p65信号通路。
我们使
本章未完，点击下一页继续阅读