765.隐蔽、狡猾、善变(3/3)
制。然后我们询问PDL1上调是否是RT后MDSCs介导的免疫抑制的机制之一。通过流式细胞术分析辐照后MDSC中PDL1的表达。图4E显示，与未处理组相比，受照射肿瘤的MDSC中的PDL1表达在照射后不久显着增加（照射后第三天：ctrlvs.RT443.9±175.3auvs.1328.0±324.3au，P<0.05）.然而，此后PDL1表达继续下降，局部照射组在照射后第3周显着低于未治疗组（ctrlvs.RT1，465.0±399.6auvs.407.5±164.8au，P<0.05）。外周血中MDSCs的PDL1表达与局部肿瘤部位的表达趋势相同。
以上数据表明ARG1表达的上调是照射后PMNMDSCs抑制功能的合理机制。然而，不涉及PDL1和iNOS的调节。为了进一步证实这一假设，在辐射后通过灌胃给予ARG1抑制剂norNOHA。10/kg/dnorNOHA有效地将ARG1活性从3.780.39U/L降低到2.020.25U/L（P<0.01）。
RT后给予norNOHA显着增加CD8T细胞比例（RTvs.RTnorNOHA2.420.62vs.6.140.64，P<0.01），并伴有肿瘤再生延迟。iNOS抑制剂1400W对肿瘤再生长没有影响。
我们的结果表明，RT通过上调肿瘤内PMNMDSC的百分比和ARG1活性来促进肿瘤免疫逃避。推测抑制PMNMDSCs及其ARG1活性可能是一种新的抗肿瘤策略是合理的。越来越多的证据表明，PDE5抑制剂可以抑制TB小鼠和癌症患者MDSC中iNOS和ARG1的活性和表达。因此，通过灌胃给予西地那非20/kg/d，以研究它是否可以促进RT的抗肿瘤作用并阐明潜在机制。如图5B所示，正如我们预期的那样，西地那非延迟了照射后的肿瘤再生长，这与阳性对照NorNOHA相当。TME的免疫特征表明，当给予西地那非时，肿瘤内PMNMDSC的比例从38.66±4.24下降到23.57±2.38。
此外，西地那非也显着降低了ARG1的表达。为了进一步检查西地那非对MDSC的抑制是否真的导致抗肿瘤免疫增强，我们分析了肿瘤内CD8T细胞的比例和活性。流式细胞术分析表明CD8T细胞的百分比从2.42±0.62增加到7.21±1.22。
此外，当给予西地那非时，CD8T细胞分泌的IFNγ也显着升高。因此，我们证实PDE5抑制剂西地那非通过调节PMNMDSCs改善了照射后肿瘤免疫微环境。西地那非联合放疗可能是提高放疗疗效的一种有前景的策略。
工作揭示了PMNMDSCs中ARG1通路介导RT后肿瘤再生的新机制，如图6所示。我们认为，PMNMDSCs是辐照招募的主要亚型，而不是MMDSCs。在广泛的免疫抑制机制中，ARG1的上调和激活是PMNMDSCs在放疗后抑制CD8T细胞的主要机制。为了克服PMNMDSCs引起的免疫抑制，我们提出并证明，sildenafil和RT联合使用降低了PMNMDSCs在TME内的募集和免疫抑制作用，激活了CD8T细胞应答，导致肿瘤生长延迟。综上所述，我们的研究结果为缓解免疫抑制TME以提高RT治疗效果提供了一种新的解决方案。虽然所有这些结果都是在LLC小鼠模型中进行的，但同样的机制是否适用于其他肿瘤模型尚不清楚。此外，在不同的辐射方案下，MDSCs及其亚型如何影响TME仍未确定。因此，这些问题还需要进一步的研究来解决。
以上数据表明ARG1表达的上调是照射后PMNMDSCs抑制功能的合理机制。然而，不涉及PDL1和iNOS的调节。为了进一步证实这一假设，在辐射后通过灌胃给予ARG1抑制剂norNOHA。10/kg/dnorNOHA有效地将ARG1活性从3.780.39U/L降低到2.020.25U/L（P<0.01）。
RT后给予norNOHA显着增加CD8T细胞比例（RTvs.RTnorNOHA2.420.62vs.6.140.64，P<0.01），并伴有肿瘤再生延迟。iNOS抑制剂1400W对肿瘤再生长没有影响。
我们的结果表明，RT通过上调肿瘤内PMNMDSC的百分比和ARG1活性来促进肿瘤免疫逃避。推测抑制PMNMDSCs及其ARG1活性可能是一种新的抗肿瘤策略是合理的。越来越多的证据表明，PDE5抑制剂可以抑制TB小鼠和癌症患者MDSC中iNOS和ARG1的活性和表达。因此，通过灌胃给予西地那非20/kg/d，以研究它是否可以促进RT的抗肿瘤作用并阐明潜在机制。如图5B所示，正如我们预期的那样，西地那非延迟了照射后的肿瘤再生长，这与阳性对照NorNOHA相当。TME的免疫特征表明，当给予西地那非时，肿瘤内PMNMDSC的比例从38.66±4.24下降到23.57±2.38。
此外，西地那非也显着降低了ARG1的表达。为了进一步检查西地那非对MDSC的抑制是否真的导致抗肿瘤免疫增强，我们分析了肿瘤内CD8T细胞的比例和活性。流式细胞术分析表明CD8T细胞的百分比从2.42±0.62增加到7.21±1.22。
此外，当给予西地那非时，CD8T细胞分泌的IFNγ也显着升高。因此，我们证实PDE5抑制剂西地那非通过调节PMNMDSCs改善了照射后肿瘤免疫微环境。西地那非联合放疗可能是提高放疗疗效的一种有前景的策略。
工作揭示了PMNMDSCs中ARG1通路介导RT后肿瘤再生的新机制，如图6所示。我们认为，PMNMDSCs是辐照招募的主要亚型，而不是MMDSCs。在广泛的免疫抑制机制中，ARG1的上调和激活是PMNMDSCs在放疗后抑制CD8T细胞的主要机制。为了克服PMNMDSCs引起的免疫抑制，我们提出并证明，sildenafil和RT联合使用降低了PMNMDSCs在TME内的募集和免疫抑制作用，激活了CD8T细胞应答，导致肿瘤生长延迟。综上所述，我们的研究结果为缓解免疫抑制TME以提高RT治疗效果提供了一种新的解决方案。虽然所有这些结果都是在LLC小鼠模型中进行的，但同样的机制是否适用于其他肿瘤模型尚不清楚。此外，在不同的辐射方案下，MDSCs及其亚型如何影响TME仍未确定。因此，这些问题还需要进一步的研究来解决。